快捻久留针刺法对后循环缺血性眩晕大鼠的治疗作用分析
眩晕是临床上常见的一种疾病， 是机体对空间关 系的定向或平衡感觉障碍。临床发病率在 10% 以 上 ［1 ］ ， 表现为站立不稳、 平衡失调、 倾倒、 偏向指物等 症状， 严重影响病人的生活 ［2 ］ 。眩晕发病机制复杂， 多见于包括前庭神经、 前庭感受器及相应神经中枢在 内的前庭缺血导致的功能紊乱。而后循环缺血是引起 前庭系统缺血的主要原因， 临床上较为多见 ［3 ］ 。本实 验以不完全脑缺血眩晕模型大鼠 ［4 ］ 作为研究对象， 分 析针刺治疗对大鼠前庭神经核血流量的变化以及旋转 刺激后跳台潜伏期、 平衡性的变化， 探讨快捻久留针刺法治疗后循环缺血性眩晕的机制。
1 材料和方法
1． 1 实验材料
1． 1． 1 实验动物 SPF 级健康 SD 大鼠， 雌、 雄对半， 体质量 180 ～250 g。由北京维通利华实验动物技术公 司提供， 动物许可证号:SCXK(京)2016 －0011， 合格证 号:No． 11400700246872。大鼠适应性喂养 7 天后开始 实验。喂养温度 20℃ ～ 25℃， 湿度维持在 40% ～ 70%， 自由给食和给水。
1． 1． 2 主要药品与针具 盐酸氟桂利嗪胶囊(批号: 170220， 河南福森药业有限公司);针灸针选用 28 号 1 寸的一次性无菌不锈钢毫针(无锡佳健医疗器械股份 有限公司)。
1． 1． 3 实验仪器 DTT －2 跳台记录仪(中国医学科 学院药研所);三维立体脑定位仪(型号:DW －2000D， 成都泰盟软件有限公司);激光多普勒血流仪(型号: Moorvms － Ldf， 英国 Moor insturements 公司) ;大容量 低速离心机(DD5 台式， 湖南赫西仪器装备有限公司)。
1． 2 实验方法
1． 2． 1 造模前准备工作 ①跳台电刺激逃避反射训 练:每天进行该训练， 将实验大鼠放进跳台仪中， 适应 3 min 后给予电刺激 5 min， 刺激强度 30 V、 50 Hz。以 实验大鼠跳上跳台并保持 30 s 为训练成功， 每天训练 2 次， 连续训练 3 天， 建立牢固的实验大鼠逃避刺激的 条件反射。②平衡试验:将圆柱形木棒离地 50 cm 水 平放置， 地上铺 10 cm 厚的海绵软垫， 正常大鼠可在圆 木棒上停留超过 3 min。以大鼠在木棒上停留时间大 于 3 min 为阴性;小于 3 min 为阳性。
1．2． 2 眩晕模型的建立 将实验大鼠应用 10% 水合 氯醛溶液(0． 35 mL/100 g 体重)麻醉， 仰卧固定， 用外 科剪剪开颈部皮肤， 钝性分离， 暴露分离出右侧 CCA 并穿线备用;然后沿右侧 CCA 近心端向胸腔方向找至 右侧 SCA 分叉处， 用弯镊勾出 SCA， 小心剥离周围组 织， 穿线备用。将实验大鼠固定于脑三维立体定位仪 上， 平颅头位， 在距大鼠前囟 10． 2 mm， 中缝右侧1． 1 ～ 2． 5 mm， 深 4． 5 ～ 5． 5 mm 处定位大鼠右侧前庭神经 核， 切开正中头皮约 1． 5 cm 切口， 用双氧水烧灼皮下 组织， 暴露前囟， 于前囟旁开及向下各 1． 5 mm 处用牙 科钻钻一直径 1． 5 mm 的圆孔， 使之刚好能容纳激光 探头， 尽量使表面平整且不钻透。然后使用多普勒激 光血流仪测定大鼠右侧前庭神经核内血流量， 描记该 部位血流值平稳后 5 min 的脑血流图。等待血流值平 稳后结扎右侧 CCA、 SCA， 持续描记血流曲线 10 min。 术后肌注青霉素 4 万单位。术后脑血流量明显下降且 第 2 天仍存活的大鼠视为造模成功。
1． 2． 3 分组及各组大鼠处理方法 将造模成功的大 鼠按体重随机分为模型组、 药物组、 普通针刺组和快捻 久留针组， 另外设假手术组。模型组:制备缺血模型后 不做其他处理， 大鼠自由摄食饮水饲养;药物组:将盐 酸氟桂利嗪胶囊配制成 0． 153 mg/mL 的混悬溶液， 给 药的容积为 10 mL/kg(等同于 9 倍临床用量)， 每天灌 药 1 次， 连续 10 天;普通针刺组:每天给予针刺治疗， 参照 《实验针灸学》 动物标准穴位图谱等文献 ［5 －6 ］ ， 选 取大鼠百会、 双侧率谷穴、 双侧风池穴， 给予常规剪毛 消毒， 柔性固定后用 28 号 1 寸针灸毫针快速刺入皮 下， 进针深度为 8 mm， 每次 30 min， 每日 1 次， 连续 10 天;快捻久留针组:选穴及进针手法同普通针刺组， 进 针后即用右手拇指腹和食指桡侧缘持针做捻转动作， 频率 200 ～300 次/min， 连续行针 1 min， 半小时后再次 行针 1 次， 留针 1 h， 每日1 次， 连续10 天;假手术组仅 手术分离大鼠右侧 CCA 及 SCA， 不做其他处理， 自由 摄食饮水饲养。
1． 3 指标检测
1．3． 1 大鼠行为学表现 观察实验大鼠的形态外观、 反应能力、 精神状态、 行走姿势、 活动情况、 进食水量及 体重的变化。
1． 3． 2 缺血性眩晕模型大鼠前庭神经核组织血流量 的变化 使用多普勒激光血流仪测定每组实验大鼠干 预前、 后右侧前庭神经核部位的血流量， 计算干预前后 该部位血流量的变化。
血流量变化的计算:血流变化率 = (造模后血流 量 － 造模前血流量) /造模前血流量 ×100%。 1． 3． 3 旋转刺激眩晕模型大鼠跳台逃避时间实验 将实验大鼠置入离心机并以 300 转/min 的转速匀速 旋转 30 s， 立即将其抓置于跳台仪中， 记录实验大鼠受 到电刺激到第 1 次跳上跳台并且 30 s 内不跌落所需 的时间(不计算实验大鼠在跳台上的时间) 记为潜 伏期。
1． 3． 4 平衡试验 如前所述大鼠停留在平衡原木上 的时间或阳性大鼠的只数。
1． 4 统计学处理
所有数据采用 SAS9． 2 统计软件进行分析处理。 计量资料以均数 ± 标准差(珋 x ± s)表示， 属于正态分布 并且方差齐性者， 进行重复测量资料方差分析和单因 素方差分析， 并采用 LSD 法进行两两间比较;不属于 正态分布者， 进行非参数检验;P≤0． 05 为差异有统计 学意义。
2 结果
2． 1 各组大鼠一般情况 假手术组设置大鼠 12 只， 造模成功大鼠 56 只， 随 机分入模型组、 药物组、 普通针刺组和快捻久留针刺组 每组各 14 只， 治疗期间模型组大鼠死亡 3 只， 药物组 大鼠死亡 1 只， 两针刺组无死亡大鼠。假手术组精神 状态良好， 行动自如;其余各组大鼠倦卧少动， 反应能 力下降， 自发活动量减少， 进食进水量减少。治疗后药 物组和针刺组大鼠情况均好于模型组， 尤以针刺组 为佳。
2． 2 对缺血性眩晕大鼠前庭神经核血流量的影响 与假手术组比较， 其他各组大鼠造模后右侧前庭 神经核血流均有明显下降(P ＜ 0． 01)。与模型组比 较， 药物组及两针刺组在治疗后右侧大脑前庭核血流 明显增加(P ＜ 0． 01);药物组及普通针刺组增加前庭 神经核的血流幅度无显著差别(P ＞ 0． 05)， 快捻久留 针刺组增加前庭神经核的血流幅度与其他各组比较有 显著性差异(P ＜0． 01)。见表 1。
2． 3 对旋转刺激缺血性眩晕模型大鼠跳台潜伏期的 影响
测定结果显示， 与假手术组比较， 其他各组大鼠跳 台潜伏期明显延长(P ＜0． 01);与模型组比较， 药物组 和针刺组在治疗后均可不同程度缩短大鼠跳台潜伏期 (P ＜0． 01) ， 其中， 药物组和普通针刺组疗效无显著 性差异(P ＞0． 05)， 快捻久留针刺组对潜伏期的影响 最为显著。见表 2。
表 1 对缺血性眩晕模型大鼠前庭神经核血流变化率的影响
组别 n 造模后血流下降率(%) 干预后血流下降率(%)
假手术组 12 3． 23 ±2． 31 4． 33 ±3． 42
模型组 11 56． 54 ±9． 84 △ 52． 57 ±18． 03
药物组 13 54． 44 ±14． 78 △ 35． 89 ±9． 95 ★
普通针刺组 14 52． 73 ±6． 85 △ 29． 59 ±6． 93 ★▲
快捻久留组 14 59． 01 ±10． 78 △ 23． 94 ±4． 86 ★▲▲●
注:与假手术组比较， △ P ＜0． 01;与模型组比较， ★ P ＜0． 01;与药物 组比较， ▲ P ＞0． 05， ▲▲ P ＜0． 01;与普通针刺组比较， ● P ＜0． 05
表 2 对旋转刺激缺血性眩晕模型大鼠跳台潜伏期的影响
组别 n 干预前潜伏期(s) 干预后潜伏期(s)
假手术组 12 57． 41 ±8． 12 57． 58 ±10． 43
模型组 11 110． 90 ±9． 73 △ 103． 27 ±9． 06
药物组 13 114． 61 ±8． 36 △ 91． 07 ±8． 63 ★
普通针刺组 14 119． 35 ±15． 93 △ 91． 42 ±10． 83 ★▲
快捻久留组 14 111． 78 ±14． 25 △ 74． 35 ±15． 83 ★▲▲●
注:与假手术组比较， △ P ＜0． 01;与模型组比较， ★ P ＜0． 01;与药物 组比较， ▲ P ＞0． 05， ▲▲ P ＜0． 01;与普通针刺组比较， ● P ＜0． 05
2． 4 对缺血眩晕模型大鼠平衡试验的影响
造模前每组实验大鼠经训练后可在圆柱形木棒上 停留 3 min 以上。说明造模前各组实验大鼠平衡性较 好。造模后分别进行观测， 除假手术组实验大鼠可在 木棒上停留 3 min 以上， 其余各组大鼠在木棒上均不 能站立， 放置后随即掉下， 停留时间小于 3 min 者为阳 性， 证明眩晕模型造模成功。干预治疗后， 与模型组比 较， 药物组及各针刺组平衡试验中的阳性动物数显著 减少(P ＜0． 05)。快捻久留针刺组疗效与药物组、 普 通针刺组相当。见表 3。
表 3 对缺血性眩晕模型大鼠平衡试验的影响
组别 n 阳性数 阴性数 阳性率(%)
假手术组 12 0 12 0
模型组 11 11 0 100
药物组 13 4 ★ 9 30． 76
普通针刺组 14 5 ★ 9 35． 71
快捻久留组 14 4 ★ 10 28． 57
注:与模型组比较， ★ P ＜0． 05
3 讨论
眩晕是种不正常的感觉体验， 是身体对空间关系、 定向感觉出现的障碍 ［7 ］ 。多由前庭系统病变导致。 由于前庭系统对缺血比较敏感 ［8 ］ ， 一定程度的后循环 缺血会导致前庭神经、 前庭感受器以及相应中枢等部 位血液灌注不足， 从而导致前庭功能紊乱， 出现眩晕、 平衡失稳等症状。改善患者前庭神经系统供血可明显 缓解眩晕症状， 利于疾病的治疗。
中医认为眩晕病的发病特点为本虚标实， 病机为 肝肾不足、 气血亏虚、 痰湿阻络、 清阳不升而致眩晕。 所以治疗上多采用活血化瘀、 填精补髓、 疏经通络的方 法。本研究则应用不同的针刺治疗方法刺激大鼠头部 相应的穴位， 利用穴位特性激发调补虚实的功能。百 会为身体诸阳之会， 可以提领一身之阳气， 具有安神定 眩之功效;风池穴为足少阳胆经之经穴， 手足少阳经与 阳维脉的交会穴， 如气血循于脉道， 升发阳经气血上注 于脑， 则髓海得养眩晕自消 ［9 －10 ］ ;率谷穴位于耳尖之 上， 为足少阳胆经经穴， 亦为与足太阳之交会穴， 具有 疏风活络、 收湿降浊之功， 诸穴合用可达到补虚泻实、 补益脑髓、 活血化瘀、 疏通经络的作用。而快速捻转及 长时间留针刺激可更大程度上激发经络之气， 提高 疗效。
采用结扎右侧颈总动脉和锁骨下动脉的方法制作 后循环缺血性眩晕大鼠模型可以最大程度的模拟后循 环缺血导致的眩晕 ［11 ］ 。由于右侧椎动脉是右侧锁骨 下动脉的下游分支， 结扎锁骨下动脉可完全使椎动脉 供血减少从而保证了后循环缺血致前庭神经核缺血模 型的成功 ［12 ］ 。通过激光多普勒血流仪检测模型大鼠 前庭神经核血流量的变化也给予了有力的证明。而跳 台逃避潜伏期反映了大鼠在机械旋转刺激后眩晕的严 重程度， 只有当大鼠眩晕症状减轻、 身体保持平衡后才 能在电刺激下迅速的跳上平台并保持稳定来躲避刺 激， 前庭系统缺血后其保持身体平衡的功能减退， 在给 予旋转刺激后恢复身体平衡的时间也相对延长， 因此， 跳台逃避潜伏期能反映模型大鼠前庭功能的缺血受损 程度。
实验结果表明相较于假手术组， 造模成功后各组 大鼠右侧前庭神经核的血流明显下降(P ＜ 0． 01)， 跳 台潜伏期显著延长(P ＜ 0． 01)， 平衡木上停留大鼠明 显减少(P ＜0． 01)。药物组和两针刺组干预后可显著 缩短模型大鼠跳台潜伏期(P ＜ 0． 01)， 亦可显著升高 右侧前庭神经核血流量(P ＜ 0． 01)， 从而改善模型大 鼠的眩晕症状， 普通针刺组和药物组相比较无明显差 异(P ＞ 0． 05);但快捻久留针刺组疗效优于药物组 (P ＜0． 01)和普通针刺组(P ＜0． 05)。而在平衡性的 检测中两针刺组和药物组具有相当的疗效 (P ＞ 0. 05)。故可得出结论针刺和药物治疗均可以通过纠 正后循环缺血、 改善前庭神经核供血来治疗眩晕， 而长 时间及高强度的行针刺激可加强疗效。
来源：针灸临床杂志 作者：董永书 行书丽 周红艳 张薇 孙为 范军铭